«مارگارت تیت» دستیار جوانش را مجبور به ازدواج با خودش می کند، تا از باطل شدن ویزایش در امریکا جلوگیری کند و به کانادا دیپورت نشود.
ماجرای فیلم ادامه قسمت اول (Night at the Museum 2006) است که حول و هوش اتفاقاتی است که در موزه اسمیت سونیان واشنگتن رخ می‌دهد. (بن استیلر) که بعد از اتفاقات داستان اول از شهر خارج شده بعد از گذشت چند وقت به شهر بر می‌گردد و متوجه می‌شود که موزه قبلی تعطیل شده و تمام اشیاء عتیقه این موزه به موزه جدیدی در واشنگتن انتقال پیدا کرده. شخصیت‌های جدید این قسمت ماجراهای جالب و خنده داری رو رقم می‌زنند که هر بیننده‌ای رو به خودش جلب می‌کند …
آلوین و سیمیون و تئودور به میامی سفر می‌کنند تا مانع خواستگاری دیو از سامانتا شوند…