Da en bank bliver ramt af et brutalt kup, peger alle beviser på ejeren og hans indflydelsesrige klienter. Men i takt med at en gruppe af FBI-agenter graver dybere ind i sagen - og de dødelige kup fortsætter - bliver det klart at en større sammensværgelse er på spil.

Jennifer Hills er stadig plaget af det forfærdelige overfald hun var udsat for (I Spit on Your Grave), men nu her nogle år senere er hun ved at få stablet et liv på benene igen. Da hendes veninde bliver overfaldet og gerningsmændene slipper for straf, beslutter hun sig for at tage sagen i egne hænder.

Seks ambitiøse studerende indenfor retsmedicin, bliver sendt til en ø på et videnskabeligt eksperiment. Der er et job i FBI i vente, for den der klarer testen bedst. Tre døde kroppe er placeret forskellige steder på øen, og de studerendes opgave er at fastslå dødsårsagen. Hvad de dog ikke ved er, at øen tidligere blev anvendt til illegale, medicinske forsøg på dødsdømte fanger, der er efterladt for at dø. Men eksperimenterne har forvandlet fangerne til noget ubeskriveligt, og de studerendes kamp for en plads i FBI, bliver snart en kamp for deres liv.